01 網織紅細胞顯微鏡計數法的計算公式(如何對網織紅細胞顯微鏡計數法進行質量控制)

網織紅細胞計數時，應在顯微鏡下計數的紅細胞數量為

【答案】：D

網織紅細胞計數時，應在顯微鏡下計數1000個紅細胞中網織紅細胞所占百分比或分數。本題正確答案是D。

網織紅細胞顯微鏡計數最快需要多長時間

15~20分鐘

網織紅細胞計數是反應骨髓造血功能的重要指標，網織紅細胞的數量可用百分率或每立方毫米血液中的絕對值數來表示

而網織紅細胞顯微鏡計數最快需要15~20分鐘

如何對網織紅細胞顯微鏡計數法進行質量控制?

①目前網織紅細胞顯微鏡計數誤差較大，應首選Miller窺盤計數；②用煌焦油藍乙醇染液時，應待乙醇完全揮發干后方能加入血液，否則可使血液凝固；③染色時間一定要充足；④染色時溫度控制在37℃為宜；⑤試管法檢測網織紅細胞時染液與血液的比例以1:1為宜，嚴重貧血時，可適量增加血液的比例；制片時血膜不宜太薄或太厚，否則會造成網織紅細胞分布不勻

如何評價細胞計數的準確性和精密度

血細胞計數的誤差分別來源于技術誤差和固有誤差.其中由于操作人員采血不順利,器材處理、使用不當,稀釋不準確,細胞識別錯誤等因素所造成的誤差屬技術誤差；而由于儀器（計數板、蓋片、吸管等）不夠準確與精密帶來的誤差稱儀器誤差,由于細胞分布不均勻等因素帶來的細胞計數誤差屬于分布誤差或計數域誤差（filed error）.儀器誤差和分布誤差統稱為固有誤差或系統誤差.技術誤差和儀器誤差可通過規范操作、提高熟練程度和校正儀器而避免或糾正,但細胞分布誤差卻難于徹底消除.因此,搞好細胞計數的質量控制一般需采用以下措施.

1．避免技術誤差,糾正儀器誤差

（1）所用器材均應清潔干燥,計數板、血蓋片、微量吸管及刻度吸管的規格應符合要求或經過校正.①計數板的鑒定：要求計數室的臺面光滑、透明,劃線清晰,計數室劃線面積準確.必要時采用嚴格校正的目鏡測微計測量計數室的邊長與底面積,用微米千分尺測量計數室的深度.美國國家標準局（NBS）規定每個大方格邊長的誤差應小于1%,即1±0.01mm,深度誤差應小于2%,即0.1±0.002mm.若超過上述標準,應棄之不用.②血蓋片應具有一定的重量,平整、光滑、無裂痕,厚薄均勻一致,可使用卡尺多點測量（至少在9個點）,不均勻度在0.002mm之內.必要時采用平面平行儀進行測量與評價,要求呈現密集平行的直線干涉條紋.最簡單的評價方法是將潔凈的蓋片緊貼于干燥的平面玻璃上,若能吸附一定的時間不脫落,落下時呈弧線形旋轉,表示蓋片平整、厚薄均勻.同時,合格的蓋片放置在計數室表面后,與支持柱緊密接觸的部位可見到彩虹.精選出的蓋片與其他蓋片緊密重合后,在掠射光線下觀察,如見到完整平行的彩虹條紋表示另一枚蓋片質量也符合要求.③目前臨床實驗室多采用一次性微量采血管采集毛細血管血,除注意定點購買使用信譽較好廠家的產品外,還應對每一批量的采血管進行抽樣檢查,可通過水銀稱重法或有色溶液比色法進行校正,誤差不應超過±1%.

（2）細胞稀釋液應新鮮、無雜質微粒.

（3）嚴格操作,從消毒、采血、稀釋、充池到計數都應規范,尤其應注意的是血樣稀釋及充池時既要作到充分混勻,又要防止劇烈震蕩為破壞紅細胞.必須一次性充滿計數室,防止產生氣泡,充入細胞懸液的量以不超過計數室臺面與血蓋片之間的矩形邊緣為宜.

（4）報告法定計量單位.

2．縮小計數域誤差或分布誤差 由于血細胞在充入計數室后呈隨機分布或稱Poisson分布（ ）,而我們所能計數的細胞分布范圍是有限的,由此造成的計數誤差稱為計數域誤差或分布誤差.縮小這種誤差的有效方法就是盡量擴大細胞計數范圍和計數數目,一般先進行誤差估計,然后決定所需計數的數目和計數范圍,只要能將誤差控制在允許范圍內即可.Berkson指出,當使用同一支吸管、同一面計數室,計數0.2mm2面積的細胞數,有望將 CV控制在可接受的7%以內.對于紅細胞計數而言,由于紅細胞數量較多,在計數室中顯得比較“擁擠”,根據Poisson公式（ ）推斷,.欲將誤差控制在變異百分數5%以內,至少需要在計數室中計數400個紅細胞,因此要求計數五個中方格的紅細胞.事實上Berkson還通過實驗證明,紅細胞的計數域誤差為s=0.92 ,較理論誤差（Poisson分布誤差）要小.

3．排除異常標本的干擾 白細胞數量在正常范圍時,相對于紅細胞數量來講,其影響可忽略,但如白細胞過高（>100×109/L）,則應對計數結果進行校正.方法是：①實際RBC=計得RBC-WBC.如當紅細胞換算后為3.5×1012/L、白細胞換算后為100×109/L時,病人實際紅細胞數應為3.4×1012/L.②在高倍鏡下計數時,避開有核細胞.有核細胞體積比正常紅細胞大,中央無凹陷,無草黃色折光,可隱約見到細胞核.此外,當病人急性嚴重貧血時網織紅細胞可提前大量釋放,也給紅細胞計數帶來一定的干擾,而且影響網織紅細胞絕對值計算結果.其校正方法有待探討

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