01 網織紅細胞計數玻片法和試管法的優缺點(凝固酶陰性葡萄球菌的玻片法試管法)

直接凝集反應的玻片法和試管法有何異同點

細菌、螺旋體和紅細胞等顆粒抗原，在適當電解質參與下可直接與相應抗體結合出現凝集，稱為直接凝集反應(direct agglutination)。凝集反應中的抗原稱為凝集原(agglutinogen)，抗全稱為凝集素(agglutinin)。常用的凝集試驗有玻片法和試管法兩種。

(一)玻片凝集試驗

玻片凝集試驗為定性試驗方法，一般用已知抗體作為診斷血清、與受檢顆粒抗原如菌液或紅細胞懸液各加一滴在玻片上，混勻，數分鐘后即可用肉眼觀察凝集結果，出現顆粒凝集的為陽性反應。

此法簡便、快速，適用于從病人標本中分離得到的菌種的診斷或分型。

玻片法還用于紅細胞ABO血型的鑒定。

(二)試管凝集試驗

試管凝集試驗為半定量試驗方法，在微生物學檢驗中常用已知細菌作為抗原液與一系列稀釋的受檢血清混合，保溫后觀察每管內抗原凝集程度，通常以產生明顯凝集現象的最高稀釋度作為血清中抗體的效價，亦稱為滴度。

在試驗中，由于電解質濃度和pH不適當等原因，可引起抗原的非特異性凝集，出現假陽性反應，因此必須設不加抗體的稀釋液作對照組。

臨床上常用的直接試管凝集試驗為肥達試驗(Widal test)和外斐試驗(Weil-Felix test)。在輸血時也常用于受體和供體兩者的紅細胞和血清的交互配血試驗。

直接凝集反應的玻片法和試管法有何異同點

凝集反應是指細菌、紅細胞等顆粒性抗原或表面覆蓋抗原的顆粒狀物質與相應抗體特異結合，在適量電解質存在的條件下，形成肉眼可見的凝集現象。

一、直接凝集反應

顆粒性抗原（如細菌、紅細胞等）直接與相應特異性抗體結合，在適量電解質存在條件下，出現肉眼可見的凝集現象，稱直接凝集反應。參加凝集反應的抗原稱為凝集原，而抗體則稱為凝集素。直接凝集反應有玻片法和試管法兩類。

（一）玻片凝集反應

在玻片上進行的直接凝集反應,主要用于抗原的定性分析,數分鐘之內便可觀察結果,快速、簡便。常用于細菌的分型鑒定,也用于ABO血型的測定。

【 實驗材料 】

（ 1）抗原：受檢菌液或受檢者的血細胞鹽水懸液。

（ 2）抗體：用于細菌鑒定的1：20稀釋診斷血清。

血型檢測的A及B診斷血清。

（ 3）生理鹽水、玻片、吸管、接種環。

【 實驗方法 】

（ 1）于潔凈玻片的一端加診斷血清1滴，另一端加生理鹽水1滴作陰性對照。

（ 2）用接種環取待檢菌液或血細胞懸液分別涂于診斷血清和生理鹽水，混勻。

（ 3）輕搖玻片，靜置數分鐘，觀察結果。

【 結果分析 】

玻片上抗原凝集成肉眼可見的小團塊狀或絮狀凝集物，其周圍液體澄清，為陽性反應。陰性反應和生理鹽水對照均不發生凝集，為均勻混濁的乳狀液。

【 注意事項 】

細菌鑒定時，特別是腸道菌種的沙門菌屬或志賀菌屬，原則上先用多價診斷血清檢測，如為陽性，再用單價診斷血清進行分群或定型。血型測定時，室溫需保持在

20oC左右，若低于10oC，易出現冷凝集現象而造成假陽性的錯誤診斷。

（二）試管凝集反應

是用定量的顆粒性抗原懸液與一系列倍比稀釋的待檢血清在試管中進行的凝集反應，根據試驗結果判定待檢血清中有無相應抗體及其效價，對血清中抗體進行半定量分析。此法目前仍常用于某些病原微生物感染的免疫學診斷，例如，診斷傷寒和副傷寒的肥達氏（

Widal test）反應，診斷斑疹傷寒的外—裴氏反應（weil-felix test）。

【 實驗材料 】

診斷菌液, 1:10稀釋的待檢血清，生理鹽水，小試管，刻度吸管，試管架，恒溫水浴箱。

【 實驗方法 】

（1）稀釋待檢血清取8支試管排列于試管架上,依次編號,每管加入0.5ml生理鹽水。于第1管中加入0.5ml待檢血清,充分混勻后,吸出0.5ml加入第2管,同法混勻后又吸出0.5ml加入第3管,依次類推,連續稀釋至第7管,最后從第7管中吸出0.5ml棄去。第8管為生理鹽水對照管。

（2）于各管中加入診斷菌液0.5ml,振搖試管架，充分混勻。

凝固酶陰性葡萄球菌的玻片法試管法

材料 菌株為實驗室保存菌株，新鮮未稀釋的兔血漿（或人血漿），生理鹽水，金黃色葡萄球菌(ATCC25923)與表皮葡萄球菌(ATCC12228)質控菌株。

玻片法:取未稀釋的新鮮兔血漿和生理鹽水各一滴分別滴于載玻片，取待檢菌菌落少許，分別混合，立即觀察結果，細菌聚集成團塊或無法混勻為陽性，反之陰性，用于測定凝集因子；

試管法:取3支試管，各加0.5ml1：4稀釋的新鮮兔血漿，加1～3個菌落入1試管，充分研磨均勻，2、3試管加凝固酶陽性、陰性株作對照，置37℃水浴3～4h，觀察結果，細菌是試管內血漿凝固呈膠凍狀為陽性，反之為陰性，用于測定游離型凝固酶。

方法評價 公認采用兔血漿較好，許多實驗室用病人血漿或血庫血漿來代替，因病人血漿中含有各種抗體、藥物，尤其某些病人血漿中纖維蛋白含量低下或受各種不同抗凝劑的影響甚至血漿被污染，故一定程度上影響了結果的準確性。采用玻片法檢測凝聚因子，有10%～15%金黃色葡萄球菌呈假陰性，因此必須用試管法驗證凝聚因子試驗。

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