01 網織紅細胞計數采用的染色方法是(關于網織紅細胞染色，錯誤的是（　　）。)

網織紅細胞計數采用的染色方法是

【答案】：B

網織紅細胞計數可使用普通光學顯微鏡法、網織細胞計數儀法和血細胞分析儀法。前者的原理是網織紅細胞經體外活體染色，其胞體內RNA的磷酸基帶有負電荷，能與新亞甲藍、煌焦油藍、中性紅等堿性染料帶正電荷的有色反應基團結合，后兩種方法與此不同，是用熒光染料(如吖啶橙、派若寧-Y)使網織紅細胞內RNA著色。因此，本題正確答案是B。

手工法網織紅細胞顯微鏡計數法，染色液可為

正確答案:D

解析：用于網織紅細胞計數的染液有煌焦油藍、新亞甲藍、中性紅

。

檢測網織紅細胞有些什么方法?如何評價?

常規采用玻片法，由于玻片法容易使混合血液中的水分蒸發，染色時間偏短，因此結果偏低。試管法容易掌握，重復性較好，被列為手工法網織紅細胞計數的參考方法。近年來，國內使用米勒窺盤進行計數，規范了計算區域，減少了實驗誤差，使結果準確性有所提高。

目前，國外逐步使用網織紅細胞儀器法測定，可自動染色、自動分析，自動打印出各階段網織紅細胞的分布圖，結果準確。

最新血細胞分析儀的應用，為網織紅細胞計數提供了更先進的測試手段，這類儀器采用熒光染色和激光測量的原理，不但能客觀地測量大量網織紅細胞，而且還能根據熒光強度，將其分為高熒光強度、中熒光強度和低熒光強度三類，這種分類法對估計化療后骨髓造血功能的恢復及骨髓移植效果有較重要的意義。

網織紅細胞計數

網織紅細胞 Miller;窺盤法;儀器法

Key words:Reticulocyte;Miller ocular;Analyzer

網織紅細胞是骨髓最新被釋放到外周血的成熟紅細胞的前提紅細胞，同成熟紅細胞相比，其細胞內仍殘存小量的RNA（嗜堿性物質），是反映骨髓造血功能的早期指標。目前測定網織紅細胞的自動分析儀主要有：多參數流式細胞儀（FCM），某些全自動血液分析儀，如：Sysmex-R系列分析儀，Miles H3型血液分析儀，Coulter Maxm型分析儀，Abbott CD3500血液分析儀[1,2]。國內多采用顯微鏡目測法。現將Sysmex-R3500分析儀，COULTER MAXM分析儀與Miller窺盤法的測定結果進行探討。

1 材料與方法

1.1 材料

(1)SYSMEX-R3500分析儀：日本希森美康株式會社生產。原裝試劑盒和質控物，批號分別是ZA9004，11130091。(2)COULTER MAXM 分析儀：美國COULTER 公司生產。原裝試劑盒和質控物，批號分別是109155，105379K。試劑盒由試劑A與試劑B組成，其主要成分分別是0.06%新亞甲藍與0.08%硫酸。(3)Miller窺盤法的試劑盒：由TONYAR DIAGNOSTICS.INC生產的ASK BCB Solution，批號A10。成分為焦油藍4 g/L與氯化鈉9 g/L。

1.2 方法

(1)SYSMEX-R3500分析儀測定原理：熒光染料堿性槐黃（或者全胺O）（Auramine O,AO）與網織紅細胞內RNA結合，以氬激光束為光源進行測定。操作步驟：混勻血液，直接測定網織紅細胞。(2)COULTER MAXM 分析儀測定原理：血液標本與新亞甲藍孵育活體染色，加入酸性試劑，使紅細胞內的血紅蛋白溢出，保存被染色的RNA于細胞內，細胞通過測定體積，高頻傳導性以及激光散射（VCS）而進行分析，測定出網織紅細胞。操作步驟：向A管加入4滴與50 μl血液標本，混勻，室溫16℃～30℃放置5 min～60 min.取A管液體2 μl于B管，加入試劑B液2 ml，等30 s，手動進樣檢測。(3)Miller窺盤法原理：煌焦油藍活體染色法。操作步驟：見全國臨床檢驗操作規程。為了重復性好，CV值較低，本次實驗采取了計數500個紅細胞內的網織紅細胞百分數。(4)測定SYSMEX-R3500，COULTER MAXM的批內，批間精密度，并與Miller窺盤法進行比較。分別用SYSMEX-R3500分析儀，COULTER MAXM分析儀與Miller窺盤法對130份正常人標本進行網織紅細胞測定，方差分析統計結果

一位熟練的檢驗工作人員對同一標本用Miller窺盤法重復測定15次，結果如下：均值=1.177 5(0.52～1.89)，S=0.321 9，CV(%)=27.34。

2.7 用SYSMEX-R3500分析儀，COULTER MAXM分析儀，顯微鏡目測法(Miller窺盤法)同時測定130份血常規在正常范圍的標本。結果F=3.87，P<0.05，差異有顯著性。差異性分析(見表6)，相關性分析(見表7)。表6 差異性分析（略）表7 直線相關性分析（略）注：※差異無顯著性，★差異有顯著性，★★差異有極顯著性，△相關。

關于網織紅細胞染色，錯誤的是（　　）。

【答案】：E

網織紅細胞染色使用的是活體染色法，固定細胞后殺死了細胞對細胞造成了損害導致染色失敗。

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