01 網織紅細胞計數流式細胞儀法與儀器法熒光染料(網織紅細胞計數)

網織紅細胞計數

網織紅細胞 Miller;窺盤法;儀器法

Key words:Reticulocyte;Miller ocular;Analyzer

網織紅細胞是骨髓最新被釋放到外周血的成熟紅細胞的前提紅細胞，同成熟紅細胞相比，其細胞內仍殘存小量的RNA（嗜堿性物質），是反映骨髓造血功能的早期指標。目前測定網織紅細胞的自動分析儀主要有：多參數流式細胞儀（FCM），某些全自動血液分析儀，如：Sysmex-R系列分析儀，Miles H3型血液分析儀，Coulter Maxm型分析儀，Abbott CD3500血液分析儀[1,2]。國內多采用顯微鏡目測法。現將Sysmex-R3500分析儀，COULTER MAXM分析儀與Miller窺盤法的測定結果進行探討。

1 材料與方法

1.1 材料

(1)SYSMEX-R3500分析儀：日本希森美康株式會社生產。原裝試劑盒和質控物，批號分別是ZA9004，11130091。(2)COULTER MAXM 分析儀：美國COULTER 公司生產。原裝試劑盒和質控物，批號分別是109155，105379K。試劑盒由試劑A與試劑B組成，其主要成分分別是0.06%新亞甲藍與0.08%硫酸。(3)Miller窺盤法的試劑盒：由TONYAR DIAGNOSTICS.INC生產的ASK BCB Solution，批號A10。成分為焦油藍4 g/L與氯化鈉9 g/L。

1.2 方法

(1)SYSMEX-R3500分析儀測定原理：熒光染料堿性槐黃（或者全胺O）（Auramine O,AO）與網織紅細胞內RNA結合，以氬激光束為光源進行測定。操作步驟：混勻血液，直接測定網織紅細胞。(2)COULTER MAXM 分析儀測定原理：血液標本與新亞甲藍孵育活體染色，加入酸性試劑，使紅細胞內的血紅蛋白溢出，保存被染色的RNA于細胞內，細胞通過測定體積，高頻傳導性以及激光散射（VCS）而進行分析，測定出網織紅細胞。操作步驟：向A管加入4滴與50 μl血液標本，混勻，室溫16℃～30℃放置5 min～60 min.取A管液體2 μl于B管，加入試劑B液2 ml，等30 s，手動進樣檢測。(3)Miller窺盤法原理：煌焦油藍活體染色法。操作步驟：見全國臨床檢驗操作規程。為了重復性好，CV值較低，本次實驗采取了計數500個紅細胞內的網織紅細胞百分數。(4)測定SYSMEX-R3500，COULTER MAXM的批內，批間精密度，并與Miller窺盤法進行比較。分別用SYSMEX-R3500分析儀，COULTER MAXM分析儀與Miller窺盤法對130份正常人標本進行網織紅細胞測定，方差分析統計結果

一位熟練的檢驗工作人員對同一標本用Miller窺盤法重復測定15次，結果如下：均值=1.177 5(0.52～1.89)，S=0.321 9，CV(%)=27.34。

2.7 用SYSMEX-R3500分析儀，COULTER MAXM分析儀，顯微鏡目測法(Miller窺盤法)同時測定130份血常規在正常范圍的標本。結果F=3.87，P<0.05，差異有顯著性。差異性分析(見表6)，相關性分析(見表7)。表6 差異性分析（略）表7 直線相關性分析（略）注：※差異無顯著性，★差異有顯著性，★★差異有極顯著性，△相關。

白細胞分類計數是根據什么原理進行的

白細胞分類計數是將血液中的白細胞分類統計的一種方法，白細胞分為中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞、淋巴細胞和單核細胞共五種。

其中中性粒細胞占全部白細胞總數的50%～70%，因此中性粒細胞的增減必然影響到白細胞總數的增減。它們都有各自的特殊功能。

中性粒細胞：桿狀核1%-5%(0.04-0.5)×10/L，分葉核50%-70%(2-7)×10/L，嗜酸粒細胞：0.5%-5.0%(0.05-0.5)×10/L；嗜堿粒細胞：0%-1%(0-0.1)×10/L；淋巴細胞：20%-40%(0.2-0.4)×10/L；單核細胞：3%-8%(0.08-0.8)×10/L。

擴展資料

白細胞分類計數：

（1）中性粒細胞增多：急性化膿感染、粒細胞白血病、急性出血、溶血、手術后、尿毒癥、酸中毒、急性汞中毒、急性錯中毒等。減少：傷寒、副傷寒、瘧疾、流感、化學藥物中毒，X線和輻射、抗癌藥物化療、極度嚴重感染、再障、粒細胞缺乏等。

（2）嗜酸性粒細胞增多：變態反應、寄生蟲病、某些皮膚病、某些血液病、手術后、燒傷等。減少：傷寒、副傷寒、以及應用腎上腺皮質激素后。

（3）嗜堿性粒細胞增多：慢性粒細胞白血病、霍奇金病、腫瘤轉移、鉛及鉍中毒等。

（4）淋巴細胞增多：百日咳、傳染性單核細胞增多癥、慢性淋巴細胞白血病、麻疹、腮腺炎、結核、傳染性肝炎等。減少：多見于傳染病急性期、放射病、細胞免疫缺陷等。

（5）單核細胞增多：結核、傷寒、亞急性感染性心內膜炎、瘧疾、黑熱病、單核細胞白血病、急性傳染病的恢復期等。

五分類血球儀白細胞做不出來是什么原因

血細胞分析儀的工作原理及其近期發展姜穗(溫州醫學院附屬第二醫院臨床工程科浙江省 溫州市325027) ［摘要］本文簡要介紹了血細胞分析儀的主要工作原理，各主要廠家在血細胞分析儀上采用的白細胞分類技術及業界的技術進展

［關鍵詞］血細胞分析儀，紅細胞，血小板，白細胞，計數The Work Principle Of Hematology AnalyzerAnd Its Near Period The DevelopmentJiang Sui(Clinical Engineering Department of The Se買粉絲nd Hospital of Wenzhou Medical College, Wenzhou Zhejiang ,China)Abstract:Tise paper introces the major principle of hematology analyzer,the categorized technology of white blood cell mainly used by manufacturer and the development of analyzing technology

Keyword: hematology analyzer,red blood cell,platelet,white blood cell,買粉絲unter 自50年代初庫爾特先生發明了粒子計數技術的專利，制造了第一臺血細胞分析儀并應用于臨床以來，血細胞分析儀的發展已有50年的歷史

血細胞分析儀實質上是指對一定體積內血細胞數量及異質性進行分析的儀器

最初的血細胞計數儀（Cell Counter）僅能計數紅細胞（RED）和白細胞(WBC)，后來又有了血紅蛋白（HBG）、血小板(PLT)、紅細胞壓積（HCT）、平均紅細胞體積（MCV）等幾個參數

而發展成為血細胞分析儀（Hematology Analyzer）后，又增加了許多分析和計算參數，如紅細胞體積分布寬度（RDW）、平均血小板體積（MPV）、血小板體積分布寬度(PDW)、血小板壓積(PCT)、大血小板比率、白細胞三分群、白細胞五分類、血紅蛋白濃度分布寬度、異常淋巴細胞提示、幼稚細胞提示等各種參數和功能也不斷地添加到一些品牌的儀器上

電阻檢測法的基本原理是：在待測液體中置一微孔，在微孔的兩端各加一定電壓的電極，當液體中的顆粒巾進經過微孔時，電極間的電阻就會產生訓瞬間的變化，以因而產生電脈沖，對這種電脈沖進行計數就可得到顆粒的數量，脈沖幅度的大小表示顆粒的體積的大小，經過對各種細胞所產生脈沖的大小的電子的選者擇，可以區分出不同種類的細胞；在液體中加上一定的負壓就能使經過微孔的液體流動

隨著電子技術、流式細胞技術、激光技術、電子計算機技術和新熒光化學物質等多種高科技技術在臨床檢驗工作的應用，使血細胞分析儀在自動化程度、先進功能和完美設計方面提高到了一個嶄新的階段，血細胞分析儀已經不僅僅局限在進行常規的血細胞分析，還增加了許多擴展功能，例如將網織紅細胞（RET）的計數和分析功能加入其中，一些儀器還另外增加了幼稚細胞分析和有核紅細胞分析功能，甚至對血液細胞中某些寄生蟲進行提示，更有一些儀器把流式細胞分析儀的某些功能和并到血細胞分析儀上，在進行常規血細胞分析時可得到某些淋巴細胞亞群的分析結果

在常規血細胞計數儀上，紅細胞（RBC）、血小板（PLT）共用一個測量通道，血紅蛋白含量（HGB）的測定在任何類型、檔次的儀器中其測試原理都是相同的

白細胞的計數和分類有其專用的通道，現我們就對分析儀上各測試項目所使用的技術方法和原理作些簡要介紹

一、血紅蛋白含量測定血紅蛋白含量的測定是在被稀釋的血液中加入溶血劑后，使紅細胞釋放出血紅蛋白，后者與溶血劑結合形成血紅蛋白衍生物，進入血紅蛋白測試系統，在特定波長（一般在530-550nm）下比色，吸光度的變化與液體中Hb含量成比例，儀器便可顯示Hb濃度

不同系列的血液分析儀配套溶血劑配方不同，形成的血紅蛋白衍生物也不同，但大多數的最大吸收光譜接近540nm

近年來許多高檔的分析儀上采用了激光散射法進行單個血紅細胞血紅蛋白的分析，以盡量減少高WBC、乳糜血、高膽紅素等對HBG比色的影響

二、血紅細胞及血小板的檢測血紅細胞的檢測是血液分析儀的重要組成部分，紅細胞的檢測以往主要還是使用阻抗法對紅細胞的數目和體積計數，以此分選出不同大小的信號并打印出紅細胞體積分布直方圖

但現在也采用光學和電阻抗法結合的處理方法對紅細胞體積進行三維空間分析（3D）以期得到更正確的結果

如拜爾的ADVIA 120以光散射法檢測紅細胞，以低角度前向光散射和高角度散射兩個測量系統同時測量1個紅細胞，根據低角度光轉換能量的大小測量單個紅細胞體積與總數；根據高角度的光散射得出單個血紅蛋白濃度，可準確得出MCV（平均紅細胞體積）、MCH（平均血紅蛋白含量）、MCHC（平均血紅蛋白濃度）測定值，并繪出紅細胞散射圖，單個紅細胞體積及紅細胞內Hb含量的直方圖及求出RWD（紅細胞體積分布寬度）、HDW（紅細胞血紅蛋白分布寬度）等參數

由于血小板和紅細胞體積的明顯差異，很容易用一個限定閾值將兩者同時測得的光電信號區分

因此，迄今為止全血分析中血小板、紅細胞檢查均采用一個共用的分析系統

但由于血小板和紅細胞測量信號常有交叉，如大血小板的脈沖信號可能被誤認為紅細胞而計數、小紅細胞的脈沖信號可能進入血小板通道，造成實驗誤差

各血細胞分析儀生產廠家采用多種先進技術以減少血小板計數的干擾，以下我們就分別給予介紹：1、掃流技術（sweep flow）：由于血小板和紅細胞在同一個計數池中計數，紅細胞體積較大，在通過正中計數感應區時會形成一個大脈沖，若有回流會同時又產生一個因渦流再度進入感應區邊緣而形成的小脈沖使電極可能感應到相當于血小板大小的小脈沖，使血小板計數假性增多

掃流技術是在進行紅細胞和血小板計數的同時，在紅細胞計數小孔的后面有一個穩定的液流通過，這樣可以使后的紅細胞被立即沖走，以防止回到感應區被計數為血小板

2、防反流裝置：為

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