01 網織紅細胞計數手工法(高中低熒光網織紅細胞意義)

手工法網織紅細胞顯微鏡計數法，染色液可為

正確答案:D

解析：用于網織紅細胞計數的染液有煌焦油藍、新亞甲藍、中性紅

。

檢測網織紅細胞有些什么方法?如何評價?

常規采用玻片法，由于玻片法容易使混合血液中的水分蒸發，染色時間偏短，因此結果偏低。試管法容易掌握，重復性較好，被列為手工法網織紅細胞計數的參考方法。近年來，國內使用米勒窺盤進行計數，規范了計算區域，減少了實驗誤差，使結果準確性有所提高。

目前，國外逐步使用網織紅細胞儀器法測定，可自動染色、自動分析，自動打印出各階段網織紅細胞的分布圖，結果準確。

最新血細胞分析儀的應用，為網織紅細胞計數提供了更先進的測試手段，這類儀器采用熒光染色和激光測量的原理，不但能客觀地測量大量網織紅細胞，而且還能根據熒光強度，將其分為高熒光強度、中熒光強度和低熒光強度三類，這種分類法對估計化療后骨髓造血功能的恢復及骨髓移植效果有較重要的意義。

影響手工法血細胞計數結果的因素有哪些

血細胞計數的誤差分別來源于技術誤差和固有誤差.其中由于操作人員采血不順利,器材處理、使用不當,稀釋不準確,細胞識別錯誤等因素所造成的誤差屬技術誤差；而由于儀器（計數板、蓋片、吸管等）不夠準確與精密帶來的誤差稱儀器誤差,由于細胞分布不均勻等因素帶來的細胞計數誤差屬于分布誤差或計數域誤差（filed error）.儀器誤差和分布誤差統稱為固有誤差或系統誤差.技術誤差和儀器誤差可通過規范操作、提高熟練程度和校正儀器而避免或糾正,但細胞分布誤差卻難于徹底消除.因此,搞好細胞計數的質量控制一般需采用以下措施.

1．避免技術誤差,糾正儀器誤差

（1）所用器材均應清潔干燥,計數板、血蓋片、微量吸管及刻度吸管的規格應符合要求或經過校正.①計數板的鑒定：要求計數室的臺面光滑、透明,劃線清晰,計數室劃線面積準確.必要時采用嚴格校正的目鏡測微計測量計數室的邊長與底面積,用微米千分尺測量計數室的深度.美國國家標準局（NBS）規定每個大方格邊長的誤差應小于1%,即1±0.01mm,深度誤差應小于2%,即0.1±0.002mm.若超過上述標準,應棄之不用.②血蓋片應具有一定的重量,平整、光滑、無裂痕,厚薄均勻一致,可使用卡尺多點測量（至少在9個點）,不均勻度在0.002mm之內.必要時采用平面平行儀進行測量與評價,要求呈現密集平行的直線干涉條紋.最簡單的評價方法是將潔凈的蓋片緊貼于干燥的平面玻璃上,若能吸附一定的時間不脫落,落下時呈弧線形旋轉,表示蓋片平整、厚薄均勻.同時,合格的蓋片放置在計數室表面后,與支持柱緊密接觸的部位可見到彩虹.精選出的蓋片與其他蓋片緊密重合后,在掠射光線下觀察,如見到完整平行的彩虹條紋表示另一枚蓋片質量也符合要求.③目前臨床實驗室多采用一次性微量采血管采集毛細血管血,除注意定點購買使用信譽較好廠家的產品外,還應對每一批量的采血管進行抽樣檢查,可通過水銀稱重法或有色溶液比色法進行校正,誤差不應超過±1%.

（2）細胞稀釋液應新鮮、無雜質微粒.

（3）嚴格操作,從消毒、采血、稀釋、充池到計數都應規范,尤其應注意的是血樣稀釋及充池時既要作到充分混勻,又要防止劇烈震蕩為破壞紅細胞.必須一次性充滿計數室,防止產生氣泡,充入細胞懸液的量以不超過計數室臺面與血蓋片之間的矩形邊緣為宜.

（4）報告法定計量單位.

2．縮小計數域誤差或分布誤差 由于血細胞在充入計數室后呈隨機分布或稱Poisson分布（ ）,而我們所能計數的細胞分布范圍是有限的,由此造成的計數誤差稱為計數域誤差或分布誤差.縮小這種誤差的有效方法就是盡量擴大細胞計數范圍和計數數目,一般先進行誤差估計,然后決定所需計數的數目和計數范圍,只要能將誤差控制在允許范圍內即可.Berkson指出,當使用同一支吸管、同一面計數室,計數0.2mm2面積的細胞數,有望將 CV控制在可接受的7%以內.對于紅細胞計數而言,由于紅細胞數量較多,在計數室中顯得比較“擁擠”,根據Poisson公式（ ）推斷,.欲將誤差控制在變異百分數5%以內,至少需要在計數室中計數400個紅細胞,因此要求計數五個中方格的紅細胞.事實上Berkson還通過實驗證明,紅細胞的計數域誤差為s=0.92 ,較理論誤差（Poisson分布誤差）要小.

3．排除異常標本的干擾 白細胞數量在正常范圍時,相對于紅細胞數量來講,其影響可忽略,但如白細胞過高（>100×109/L）,則應對計數結果進行校正.方法是：①實際RBC=計得RBC-WBC.如當紅細胞換算后為3.5×1012/L、白細胞換算后為100×109/L時,病人實際紅細胞數應為3.4×1012/L.②在高倍鏡下計數時,避開有核細胞.有核細胞體積比正常紅細胞大,中央無凹陷,無草黃色折光,可隱約見到細胞核.此外,當病人急性嚴重貧血時網織紅細胞可提前大量釋放,也給紅細胞計數帶來一定的干擾,而且影響網織紅細胞絕對值計算結果.其校正方法有待探討

什么是網織紅細胞

化驗介紹: 網織紅細胞是尚未完全成熟的紅細胞，在周圍血液中的數值可反映骨髓紅細胞的生成功能，因而對血液病的診斷和治療反應的觀察均有其重要意義。

網織紅細胞是紅細胞的前身。骨髓中紅細胞系統的增生發育過程是：多能干細胞→單能干細胞→原始紅細胞→早幼紅細胞→中幼紅細胞→晚幼紅細胞→網織紅細胞→成熟紅細胞。從原始紅細胞增殖到晚幼紅細胞階段共分裂3－4次，約需72小時，紅細胞數由一個變為8一16個，細胞核由大變小而濃縮，胞漿中含血紅蛋白逐漸增多。晚幼紅細胞以后細胞即不再分裂，發育過程中核被排出而成為網織紅細胞。網織紅細胞含有少量核糖核酸RNA)，用煌焦油藍染色時成網狀故名網織紅細胞。網織紅細胞進一步成熟，RNA消失而為成熟紅細胞。從晚幼紅細胞發育到成熟紅細胞約需48小時，成熟紅細胞的壽命約為120天。在正常情況下骨髓中有核紅細胞并不釋放至血循環，只有網織紅細胞和成熟紅細胞才釋入血中。因此，檢查末梢血中網織紅細胞數，可以推知骨髓生紅細胞的情況。由于紅細胞壽命約為120天，即每天約有

網織紅細胞（以下簡Retc）是反映骨髓紅系造血功能以及判斷貧血和相關疾病療效的重要指標。過去，計數Retc十分麻煩費時也不易數準，ADVIA120儀器最大的優點之一是隨時可計數Retc,十分便利，而且計數的細胞多，故很準確。該儀器對Retc可提供6個參數，包括網織紅細胞總數（Retic#）、網織紅細胞百分比（Retic%）、網織紅細胞平均體積（MCVr）、單個網織紅細胞平均血紅蛋白濃度（CHCMr）、網織紅細胞分布寬度（RDWr）、單個網織紅細胞血紅蛋白含量（CHr）等，其中意義最大的，除了總數，百分比以外，最重要的網織紅細胞血紅蛋白含量（CHr）參數。現講述于下：

Retc是剛脫去核尚殘留有少量RNA的未完全成熟的紅細胞。正常人外周血中甚少，如增加，表示紅系統增生（如急性溶血，多數溶血性貧血和其他增生性貧血），如貧血仍不見增生，可能是重型再障。抗貧血治療后明顯上升，表示治療有效，反之效果欠佳。故網紅的總數或百分比對貧血的臨床診斷及療效觀察非常有價值。是血液最常做的項目之一。

ADVIA120儀器提供網織紅細胞中的血紅蛋白含量---（CHr）這一參數，對某些貧血的療效判斷有著重要意義。對于缺鐵性貧血的療效觀察,特別是腎衰竭、血液透析病人用重組人促紅細胞生成素（rHuEPO）治療時是必不可少的監控指標。因為這些病人自身缺乏EPO，在用了rHuEPO后，如果僅僅紅細胞升高，而CHr反而低，這叫功能性缺鐵（Functional Iron Deficiency），表明患者原來鐵儲備不足。如果網織紅細胞迅速回升，而（CHr）上升緩慢，也可能機體對鐵元素的吸收或利用障礙，當用鐵劑治療時，同時靜脈注射鐵劑，由于鐵劑過多，對人體也會產生危害，（CHr）參數有利于監控治療效果。。

ADVIA120血液分析儀測定Retc具有準確度高、重復性好、檢測速度快（75人份/小時）等優點，適合大批標本的快速檢測。同時操作簡便，臨床只需和血液常規一起抽血送檢病房檢驗室，很快就能得到滿意的結果。ADVIA120全自動血細胞分析儀所提供的參數很多，是傳統的手工法所無法比擬的。總之，ADVIA120全自動血細胞分析儀對紅細胞系統檢測可為臨床各種血液病，特別是貧血病人的診斷和治療提供依椐，為臨床診斷和科研工作提供方便。

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高中低熒光網織紅細胞意義

高中低熒光網織紅細胞意義如下：

長期以來，檢驗人員采用手工法進行網織紅細胞計數，但其精確性與計數效率不太理想。近年來隨著流式細胞術與熒光染色相結合應用。

高端全自動分析儀對網織紅細胞計數可以精確到網織紅細胞比率(、網織紅細胞絕對值、低熒光網織紅細胞、中熒光網織紅細胞、高熒光網織紅細胞、未成熟網織紅細胞。其中IRF為MFR和HFR之和，表示幼稚細胞占總RET的百分比。

通常健康人外周血以LFR為主，當骨髓受到刺激時，較多的未成熟網織紅細胞從骨髓釋放入外周血，在失血及增生性貧血時IRF在外周血中首先升高，因此與網織紅細胞比率、絕對值相比，IRF能更好地反映骨髓造血的代償能力，其數據靈敏度更高。

網織紅細胞及其相關參數主要是反映骨髓造血功能的重要指標，在臨床診斷價值方面，其靈敏度、特異性要優于傳統的紅細胞與白細胞計數，有較高的深入研究價值。

網織紅細胞百分比和網織紅細胞絕對值臨床意義相似，其增高表示骨髓紅細胞系統增生活躍，常見于溶血性貧血、急性失血、缺鐵性貧血、巨幼細胞性貧血等，還可提示相關藥物治療有效；降低則表示骨髓造血功能低下，常見于再生障礙性貧血、急性白血病、腫瘤放化療骨髓抑制等。

網織紅細胞血紅蛋白含量與體內貯存鐵數量密切相關，可反映體內近期的鐵代謝狀態，主要用于缺鐵性貧血和鐵利用障礙等慢性功能性貧血的診斷、鑒別診斷和療效觀察，與其他鐵代謝指標如鐵蛋白、轉鐵蛋白相比，具有生物變異度小，不受炎性反應影響等優勢。

越接近成熟的網織紅細胞，熒光強度越低。正常情況下，高、中熒光網織紅細胞主要存在于骨髓中，而低熒光網織紅細胞大部分存在于外周血中。高、中、低熒光網織紅細胞的變化比網織紅細胞百分數和絕對值更靈敏，可作為貧血類型和貧血程度的重要參考依據。

未成熟網織紅細胞包括高、中熒光網織紅細胞兩種，它的增高是骨髓造血功能增強的早期標志，高熒光網織紅細胞和未成熟網織紅細胞還能作為骨髓移植后造血功能恢復的早期指標。

網織紅細胞參數對于腫瘤疾病的治療也起到監測作用。化療是腫瘤治療的常用手段，但化療會對患者的骨髓有不同程度的抑制作用，易產生出血、感染的可能，嚴重者甚至危及生命。

WBC和PLT監測骨髓抑制情況均存在監測遲緩、影響因素多等缺點，且WBC和PLT明顯降低時，骨髓抑制程度已非常嚴重，不能及時采取有效的治療措施。檢測網織紅細胞相關參數能在一定程度上反映骨髓抑制情況，成為化療后骨髓抑制監測的早期指標。