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04 網織紅細胞的概念、計算方法(網織紅細胞概念錯誤的是)
Instagram刷粉絲, Ins買粉絲自助下單平台, Ins買贊網站可微信支付寶付款2024-05-28 03:17:40【】7人已围观
简介10HLA與法醫由于HLA復合體的高度多態性,在無關個體間HLA表型全相同的機率極低,故HLA復合體被看作是伴隨個體終生的特異性遺傳標記。借助HLA基因型和(或)表型檢測,可用于法醫上的個體識別。另外
由于HLA復合體的高度多態性,在無關個體間HLA表型全相同的機率極低,故HLA復合體被看作是伴隨個體終生的特異性遺傳標記。借助HLA基因型和(或)表型檢測,可用于法醫上的個體識別。另外,由于HLA復合體具有高度多態性以及單倍型遺傳的特點,使HLA分型成為鑒定親子關系的重要手段。
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11 HLA分型技術HLA分型并不只是一種應用性的臨床檢測指標,免疫遺傳學研究的發展,很大程度上依賴于以分型為主要手段的HLA多態性分析。60年代建立的并不斷完善的血清學及細胞學分型技術主要側重于分析HLA產物特異性;80年代起建立的DNA分型方法則側重于基因的分型。
11.1 血清學分型技術 11.1.1 HLAⅠ類抗原的檢測
HLAA、B、C抗原型別鑒定均借助微量淋巴細胞毒試驗(microlymphocytotoxicitytest)或稱補體依賴的細胞毒試驗(plement dependent cytotoxicitytest)。原理為取已知HLA抗血清加入待測外周血淋巴細胞,作用后加入免補體,充分作用后加入染料,在倒置顯微鏡下判斷結果,著染的細胞為死亡細胞,表示待檢淋巴細胞表面具有已知抗血清所針對的抗原。標準抗原清取自多次經產婦或計劃免疫志愿者。
11.1.2 HLADR、DQ抗原檢測該二抗原分型方法同HLAⅠ類抗原,但所用抗血清須經過血小板吸收以去除針對Ⅰ類抗原的抗體。另外,待測細胞須是經純化的B細胞。
血清學分型是一項古老的技術,雖然近年來已建立許多新的分型技術,但血清學方法目前仍是HLA分型的基礎。
11.2 細胞學分型技術
HLADw特異性與HLADP特異性可分別通過純合分型細胞(homozygote typing cell,HTC)及預致敏淋巴細胞試驗(primed lymphocyte test,PLT)檢測。二種方法的基本原理均是判斷淋巴細胞在識別非已HLA抗原決定簇后發生的增殖反應。由于分型細胞來源困難以及操作手續繁瑣,細胞學分型技術下正逐漸淘汰。
11.3 HLA的DNA分型技術
上述傳統的HLA分型方法有許多不足之處,近年來國內外已將HLA分型技術由抗原水平發展到基因水平。
11.3.1 限制性片段長度多態性檢測技術這是首先建立的對多態性進行檢測的DNA分析技術。個體間抗原特異性來自氨基酸順序的差別,后者由編碼基因的堿基順序不同所決定。這種堿基順序的差別造成限制性內切酶識位置及酶切位點數目的不同,從而產生數量和長度不一的DNA酶切片段。用特異性探針對整個基因組DNA酶切片段進行雜交,即可分析限制性長度片段多態性(restriction fragment lengthpolymorphi *** ,RFLP)。一定的內切酶組合所得到的HLARFLP可以和傳統方法測定的HLA特異性型別相關。80年代末發展起來的PCR(polymerase chain reaction)技術已被用于RFLP分析,即用等位特異限制酶裂解PCR擴增的片段,然后再進行分析,從而大提高了靈敏度。
11.3.2 PCR/SSO技術此法乃用人工合成的HLA型別特異的寡核苷酸序列作為探針,與待檢細胞經PCR擴增的HLA基因片段雜交,從而確定HLA型別,PCR技術可將HLA復合體上指定基因片段特異性地擴增5~6個數量級;而專門設計的SSO(序列特異的寡核苷酸sequencedpecific oligonucleotide)探針又能探測出等位基因間1~2個核苷酸的差異,故PCR/SSO技術具有靈敏度、特異性強、需樣本量少等優點。
11.3.3 PCR/SSP技術目前常規的HLADNA分型技術,包括上述的PCR/RFLP、PCR/SSO等,最終均需用標記的特性探針與擴增產物進行雜交,再分析結果。PCR/SSP方法用乃設計出一整套等位基因組特異性引物(sequence specific primer,SSP),借助PCR技術獲得HLA型別特異的擴增產物,可通過電泳直接分析帶型決定HLA型別,從而大大簡化了實驗步驟。
由于傳統方法在Ⅱ類抗原分型方面困難較大,故上述幾種基因分析型方法目前主要用于Ⅱ類基因座。此外,目前已建立的HLA基因分型技術還包括PCR單鏈構像多態性分析(PCRsingle strand 買粉絲nformational polymorphi *** ,PCRSSCP)和PCR 異源二聚體電泳多態即PCR指紋圖(PCr fingerprinting)分析。DNA分型技術的應用,使HLA型別分析達到了更精細的水平,并因此發現了更多的HLA多態性。HLA的DNA分型技術現已成為血清學方法的競爭者,并可能在不久的將來完全取而代之。
HLA是目前所知人體最復雜的遺傳多態性系統。HLA研究涉及免疫學、生物學、遺傳學、分子生物學、醫學等多個學科,并已發展成為一個獨立的學科分支。迄今HLA研究已達到相當深入的水平,并在諸多方面取得顯著進展,包括HLA復合體結構;HLA分子結構及其表達的調控;HLA分子功能,尤其是在抗原處理、呈遞及T細胞識別中的作用;HLA的DNA分型及多態性研究;HLA與疾病的關系;HLA與移植的關系等。HLA研究不僅使器官移植成為一種極有價值的治療手段,并給基礎與臨床免疫帶來了突破性進展。已經證實,HLA復合體中存在控制免疫應答的基因以及HLA參與約束免疫細胞間相互作用,這表示HLA涉及生命活動的各個水平與多個方面。可以預期,對HLA的研究將繼續成為免疫遺傳學最活躍的部分;對HLA的應用將擴展到基礎、臨床、預防醫學的各個領域。
薛社普的科技成就
對細胞分化規律及其可調控性提供了重要理論依據為我國男性生殖生物學及節育藥棉酚等的研究作出了重要貢獻創建了網織紅細胞與骨髓瘤細胞的胞質體雜交模型,發現波型蛋白基因被抑制與去核有關,揭開了哺乳動物紅細胞自然去核之謎和去核的雙期相現象,在國內外首次發現哺乳類紅細胞胞質中存在能逆轉惡性分裂、調節基因表達和誘導終末分化的“紅細胞去核分化因子(EDDF)”,提純的活性物質對轉化及腫瘤細胞有高活性的抑制生長和促進分化作用。克隆了不同階段終末分化期相關因子的基因全長序列及其編碼結構。提出核濃縮理論和藉以終止腫瘤細胞惡性分裂的治癌新概念。 在科學技術方面的首創性發現與貢獻。
細胞增殖與分化
基本闡明“細胞分化的可調控性”的規律,質疑“細胞分化一旦決定和已分
化后即不可逆”的傳統概念。提出細胞分化可調控性的實驗依據,為通過誘導細胞分化治療“分化疾病(如腫瘤)”和調控已分化細胞去分化以克隆動物提供理論依據。 (1)建立胚胎脊髓移植術,發現雞胚頸段脊髓存在“節前交感神經柱(Terni核團)”。該核團細胞的超量增殖和預定自動退化死亡的命運可于該段脊髓移植至適宜微環境(胸段)條件后使之存活和分化為新的節前交感柱。證明外周微環境中的支持與營養等因素可以調控細胞的分化(表明分化基因的表達可以調控)。
(2)雞胚胚層細胞可在一定時間、空間條件下改變其分化類型或在病毒的感染后癌變;已惡變的腫瘤細胞在胚體內有被誘導分化為胚胎組織的潛能。
(3)分化中的性腺可在其髓質或皮質兩個誘導拮抗抗體體系的調控下改變其性分化比率。
(4)造血系腫瘤細胞(骨髓瘤)可在誘導分化劑(如維甲酸及DMSO)或調節因子(如EDDF等細胞因子)的作用下進行分化,為腫瘤細胞的誘導分化提供理論依據。
細胞研究
在中國首次發表了同位素放射自顯影的論文,證明雞胚卵黃球沒有蛋白質合成代謝和自我更新能力,本身不能形成為細胞(雞胚內胚層細胞和血島),提出了對當時蘇聯靳柏辛斯卡婭的《活質學說》的否定觀點,并闡述了內胚層細胞和血島在雞胚發育過程中的增殖規律。
細胞調控研究
建立了節育藥的動物實驗研究模式、起效評估指標和一整套多學科的功能與形態定位、定量、定性的檢測技術方法,為中國男性生殖及國產節育藥棉酚、雷公藤單體等抗精子發生及抗生育機理作出了開拓性的系統研究。基本闡明了棉酚抗精子發生的作用環節,藥物在體內的代謝動態、毒性、毒理及三致(致癌、致畸、致突變)遺傳效應,包括對人體內精子受精、原核形成和單倍體染色體結構的影響作出評價。在國內、外發表論文70多篇,出版了《男性節育藥棉酚的實驗研究》專著(1983年人民衛生出版社,該書獲國家優秀科技書二等獎)。曾獲1986年和1987 年中央衛生部及計生委科技進步二等獎:獲WHO及美國人口委員會的基金資助,并應邀在美國9個城市進行專題報告、學術交流和科研協作。為推動棉酚走向國際,牽動WHO及美國人口委員會和在20世紀70年代成為國際男性科研的領頭課題作出貢獻。
(1)發現了藥物作用的靶細胞、靶細胞器環節和藥物損傷生精細胞線粒體的呼吸、氧化磷酸化、能源體系和人精子特異的LDH-C4酶系的分子作用機理,提出了藥物的靶細胞作用位點假說,以及靶細胞定位與藥物起效不育時間相關的計算規律。發表論文50多篇,受到國際同行重視,應邀在國際權威書列《Advances in Reproctive Hea1th Care》第6冊《Male Ferti1ity and its Regulation》(1985,y T.Lob1 and E.S.E.Hafez,MTP Press Limited)中發表綜述論文“Gossypol 買粉絲ntraception and mechanism of action”。
(2)首次在國內用14C同位素標記棉酚開展用小動物(大鼠)進行整體放射自顯影技術,結合細胞及電鏡微觀水平、定量定位技術,闡明藥物在體內吸收、分布、排泄途徑(包括糞、尿、呼氣),排出半量時間計算和代謝的藥物動力學規律,鉀(42K)代謝,相關Na-K-ATP酶系、性激素水平和三致毒副作用環節等,為節育藥臨床前的藥理、毒性毒理檢測及其安全性提供了必要的數據。發表論文20多篇,并與美國三所大學建立14C-棉酚的科研協作。
細胞機理及其研究
基本闡明哺乳類紅細胞終末分化期自然去核的機理之謎。揭示了自然去核類(哺乳類)和非去核類(鳥類)紅細胞在種系發生上“核骨架-核纖層-中間纖維(波形蛋白纖維)”體系的結構功能差異和自然去核的二期相規律,提出自然去核是種系進化演變結果的假說。創建了網織紅細胞胞質體雜交模型的實驗體系,發現哺乳類紅細胞中存在一系列顯然是進化產物的紅細胞分化去核因子(Erythroid Differentiation Denucleation Factors,EDDFs),具有調節終末分化期相關基因程序性表達、核濃(固)縮、自然去核和誘導造血系(骨髓)腫瘤細胞再分化的作用。已克隆出一系列該EDDF基因家族的cDNA序列,并在GenBank登記編號。其中與核染色質濃縮相關基因有
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