06 流式細胞儀檢測網織紅細胞的參數(流式細胞術的應用范圍)

將待測血液加入清洗劑和甲醛的等滲液體內經孵育，再加入過氧化氫（H2O2）和四氯－萘酚，細胞內過氧化酶分解產生〔O〕－，使四氯－萘酚顯色并沉淀，并定位于酶反應部位

由于酶反應強度不同，激光束照射細胞在低角度（0°－5°）和高角度（5°－14°）測定散射強度也不同

低角度反映細胞大小：由于嗜堿性粒細胞在此溶血劑中保持不溶（細胞大），故散射強；高角度反映核葉數目及大小，核葉多、核圖2、過氧化物酶通道白細胞分類原理圖 大則散射強

最后由計算機綜合處理分析，給出較準確的白細胞總數及分類計數，其中還包括了大型不染色細胞群、即非典型淋巴細胞或過氧化物酶陰性的幼稚細胞，故稱六分類

該儀器采用激光散射法檢測紅細胞和血小板，均需加入試劑；同時還可在紅細胞稀釋液中加入可染RNA的熒光染料，經激光照射激發后，對其中的網織紅細胞進行計數、分類，得到八個網織紅細胞參數

由于其采用化學染色方法來分析細胞類別，故其共使用了11種試劑來進行測試，運行成本較高

3、 雅培（Abbott）公司采用的多角度偏振光散射（MAPSS）技術以CD-3500和CD-3000型血細胞分析儀為代表的此類儀器采用了多角度偏振光散射技術進行白細胞分類計數

其原理是利用鞘流液與血標本按適當的比例混合后，使其白細胞內部結構基本保持不變（只有堿性粒細胞顆粒因有吸濕特性而其結構有較微改變），紅細胞在該鞘流液中細胞膜完整且和鞘流液的吸光指數相等，故不會干擾白細胞的檢測

用偏振激光束射照單個排列細胞（集中于一直徑30um的小股液流中），并進一步分辨細胞

該技術采用了其他儀器很少用的10°窄角和偏振加消偏振檢測法，分辨能力有所提高

它第一步先測試中性/單核細胞，用0°－90°的散射數據，再測90°D的衍射差，將嗜酸性和中性細胞分開，而嗜堿性粒細胞、淋巴細胞及單核細胞，則按其大小和內部結構的復雜性不同，所產生的散射光也各異，用可調較的門限加以區分

其采用特定程序自動儲存分析數據，并經電腦軟件處理，在屏幕上顯示6個散點圖和兩個直方圖

4、Sysmex公司的射頻（RF）加直流阻抗式（DC）的白細胞分類技術典型機型如SysmexSE-9000/SE-9500/XE-2100等

這類儀器共有四個不同的檢測系統，將標本用特殊細胞染色技術處理后再應用RF和DC技術對白細胞進行分類和計數

其共采用如下四個檢測系統：1) 淋巴、單核、粒細胞（中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞）檢測系統：該系統采用電阻抗與射頻聯合檢測方式，使用作用較溫和的溶血劑，對核及細胞型態影響不大

在內外電極上存在直流和高頻兩個發射器

由于直流電不能達到細胞質及核質，而射頻電能透入胞內測量核大小和顆粒多少，因此這兩種不同的脈沖信號的個數及高低綜合反映了細胞數量、大小（DC）和核及顆粒密度（RF）

由于淋巴細胞、單核細胞及粒細胞的大小、細胞質含量、核形態與密度均有較大差異，故可通過掃描得出其比例

2) 嗜酸性粒細胞檢測系統：該系統是利用電阻抗方式計數

血液經分血器分血后部分與嗜酸性粒細胞計數溶血劑混合，特異的溶血劑使嗜酸性粒細胞以外的所有細胞均溶解或萎縮，這種含完整嗜酸性粒細胞的液體經阻抗電路計數

3) 嗜堿性粒細胞系統：該系統檢測原理與嗜酸性粒細胞相同，不同的是其溶血劑只能保留血液中的嗜堿性粒細胞

4) 幼稚細胞檢測系統：該系統也是利用電阻抗方式計數

其原理是由于幼稚細胞上的脂質較成熟細胞少，在細胞懸液中加入硫化氨基酸后，由于脂質占位不同，結合在幼稚細胞上的硫化氨基酸較成熟細胞多，且對溶血劑有抵抗作用，故能保持幼稚細胞的形態完整而溶解成熟細胞，即可通過阻抗法檢測

四、網織紅細胞計數 網織紅細胞（簡稱網紅）計數是反映骨髓造血功能的重要指標

迄今國內仍多采用顯微鏡目測法，由于受主觀影響，其計數精度較差

20世紀90年代初，日本SYSMEX公司首先推出R-1000網紅細胞分析儀，開始用分析儀代替目測法，無論從實驗方法還是臨床應用，均取得了良好的效果

網紅細胞是晚幼紅細胞脫核后到完全成熟紅細胞之間的過渡細胞，由于其胞漿中殘存嗜堿性物質，在活體可被藍染成藍色細顆粒或網狀物而得名

，在紅細胞的發育過程中，RNA含量有明顯規律性的變化，即由原始階段較為豐富逐漸減低，至細胞完全成熟后消失或接近消失

在流式細胞儀的測量中，一般用某些染料與網紅中RNA結合發出特定顏色的熒光，進行RNA的測定，RNA可精確表示網紅細胞占成熟紅細胞的百分率（RET%）

1993年以來，可進行網紅計數的血細胞分析儀相繼問世，使血細胞分析儀的應用進入了新的階段

Coulter、Abbott、Bayer、Sysmex等眾多廠家的高端機型皆有網紅細胞計數和分析的功能

檢測原理大致以Coulter Maxam和Techni買粉絲n H*3型為代表

Coulter Maxam采用了兩種試劑，一為新亞甲藍著染紅細胞內的RNA，另一為“透明”劑使紅細胞內血紅蛋白溢出，成為“影細胞”減少測試干擾

處理后的血液在儀器上通過VCS原理進行網紅細胞的檢測，可得出RET#、RET%、網紅平均體積（MCVr）和網紅成熟指數（MI）

實驗證明其結果與FCM法高度相關（r＝0

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Techni買粉絲n H*3測試網紅則先將3ul血液加入已標準化的染液中孵育15分鐘，將儀器轉換到網紅計數程序進行檢測，即可得到網紅細胞的實驗參數

包括RET#、RET%、MCVr、RDWr（網紅體積分布寬度）、CHr（網紅內血紅蛋白量）、HDWr（網紅內血紅蛋白分布寬度）及網紅細胞分類

根據熒光強度，可將網紅細胞分成低（LFR）、中(MFR)、高(HFR)三部分

幼稚的網紅顯示最強的熒光，反之成熟紅細胞極少或沒有熒光

綜上所述，由于近年來綜合性高科技的飛速發展，血細胞分析儀上也不斷采用最新的電子、光學、化學和計算機技術，從而不斷滿足臨床工作對血細胞分析的要求，各廠家朝著高速度、多參數、多功能合成及操作更靈活和方便上發展，近期各廠家更是推出了血液分析儀的全自動流水線化，將血液常規分析、網織紅細胞分析、血片的制備（選擇、涂片、編號、染色、干燥）等系列步驟通過儀器自動完成

血液先經血細胞分析儀檢測，根據紅細胞情況決定是否作網紅計數，根據HCT改變涂片機的角度和速度，以保證合格的血涂片

根據實驗數據和直方圖的變化，計算機選擇是否需要進一步的顯微鏡檢查，特別是自動加樣系統和真空采血管的應用，不但可能避免實驗的隨機誤差，加快標本的處理速度，而且避免了某些實驗環節造成的血行感染，對工作人員的勞動保護起了關鍵作用，同時使許多操作更加的標準化，成為儀器使用和發展的潮流

參考文獻：1、許文融，谷俊俠主編，《臨床血液學檢驗》，南京：東南大學出版社出版2、叢玉隆等主編，《血細胞分析技術與臨床》，天津：天津科學技術出版社3、王淑娟等主編，《現代血細胞學圖譜》，人民衛生出版社4、 拜爾公司《拜爾診斷》5、 BECKMAN COULTER公司及Sysmex公司等產品通訊

HBL27是什么意思啊

HLA抗原是人類主要組織相容性復合體（Major Histo買粉絲patibity Complex, MHC）的表達產物，在免疫系統中主要負責細胞之間的相互識別和誘導免疫反應，調節免疫應答的功能。根據HLA抗原結構，功能與組織分布的不同，可分為三類：Ⅰ類分子為HLA-A、-B、-C系列抗原，廣泛分布于各組織有核細胞表面，包括血小板和網織紅細胞，成熟的紅細胞一般不含HLA抗原；Ⅱ類分子為HLA-D/DR、-DP、DQ系列抗原，主要在B細胞和抗原提呈細胞上表達，這兩類抗原都與移植有關，其中Ⅱ類抗原更為重要；Ⅲ類分子為補體成分。

近年來研究HLA與疾病相關性的資料表明，某些疾病的發生率與一些特殊型別的HLA檢出率有關，這些病人大多是發病機理不明并伴有免疫功能異常和有遺傳傾向性的疾病，因此，分析HLA抗原表達情況不僅有助于了解發病機理，對于疾病的診斷、預防和預后判斷都有重要意義。

HLA-B27基因屬于Ⅰ型MHC基因，基本上表達在機體中所有有核的細胞上，尤其是淋巴細胞的表面有豐富的含量。早在二十多年前，人們就已發現HLA-B27抗原的表達與強直性脊椎炎有高度相關性，超過90%的強直性脊椎炎患者其HLA-B27抗原表達為陽性，普通人群中僅5-10%的為陽性，而強直性脊椎炎由于癥狀與許多疾病相似而難以確診，因此HLA-B27的檢測在病中的診斷中有著重要意義。在脊椎性關節病這一類的疾病中除了強直性脊椎炎以外，還有許多其它的疾病與HLA-B27抗原的表達有著或多或少的相關性，因此HLA-B27的檢測在這些疾病的診斷中是一個非常有價值的指標。

二、 HLA-B27的檢測方法

常規檢測HLA抗原的方法為Terasaki 和McClelland提出的微量細胞毒實驗. 單克隆抗體和熒光素的開發使得流式細胞儀在各個領域得到空前的發展，多參數同時測定使得流式細胞術得以快速，靈敏，特異地檢測某一特定細胞群中某一特異性抗原的表達。與傳統方法相比，用流式細胞儀來檢測HLA-B27的表達，靈敏度可達100%，特異性達97.4%,陰性結果強直性脊柱炎的排除率為99.9%；結果穩定，樣本之間，不同儀器之間，不同實驗室之間可重復性高。測定值高于參比值者為陽性，反之為陰性。

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