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08 網織紅細胞染色常用染料為(臨床檢驗技師考試《專業實踐技能》測試題及答案)
Instagram刷粉絲, Ins買粉絲自助下單平台, Ins買贊網站可微信支付寶付款2024-05-17 08:23:16【】8人已围观
简介家會議，以期對檢測血液淋巴系統腫瘤所需最少、最有效的單抗數達成共識。75%與會者一致認為，對于慢性淋巴系統增殖性疾病（CLD）有9種單抗：CD5,CD19,κ,λ,CD3,CD20,CD23,CD10
抗體的質量控制是實驗的關鍵環節。抗體的質量包括其特異性、靈敏度、精密度。對這一些，一些商業化的公司對常用單抗的檢驗均推出了一系列質控物。如BECKMAN COULTER公司的Cyto-Trol、Immuno-Trol等（見表一）。
3、染色方法
細胞表面染色：大多數免疫表型分析均采用此方法。但由于許多抗原也同時存在細胞內，所以在細胞表面抗原檢測時應特別注意保持細胞膜的完整以保證檢測的特異性。表面標記又分溶血前標記和溶血后標記。若紅細胞對標記有影響或血漿成分對標記有影響的，適合溶血后標記，但要注意溶血劑膜抗原的影響，所以，溶血劑一般不含固定劑。如免疫球蛋白輕鏈檢測和陣發性血紅蛋白尿的檢測等。
細胞內染色：有些胞內抗原的檢測對白血病的免疫分型尤為重要，如TdT, MPO, cCD3, cCD79a 。胞內染色的關鍵是使細胞膜通透，把抗體或核酸染料導入胞內而不影響細胞骨架的完整性。還要保證固定和透膜的步驟不影響有關抗原與相應抗體的結合力和核酸與染料的結合。某些適用于胞內染色的試劑可能不適于表面標記分析。通常胞內染色不能與細胞活性的檢測同時進行，除非用EMA的方法。對于胞內染色，所用的熒光素應足夠小到能穿透到胞膜內。對于某些核酸染料（如DAPI、TO、AO等）為活細胞染料，無需固定或透膜。
胞膜和胞內染色：通常，先胞膜染色，固定，膜通透和胞內染色，最后是DNA染色。
三、數據的獲取和分析
流式細胞儀數據的獲取必須是在儀器性能的校準均合格的基礎上進行。由于流式細胞儀是基于對散射光信號和熒光信號進行分析的儀器，因此，儀器散射光和熒光信號的光電倍增管電壓、增益、顏色補償等參數的設定直接影響結果。同型對照的設定尤為重要。同型對照是指與單抗種宿來源相同、亞型相同、標記熒光素相同的未免疫動物的免疫球蛋白。同時考慮濃度、F/P值盡量相同，這樣陽性閾值的界定才比較準確，特別是對于弱表達抗原陽性率的測定。而DNA倍體分析中參照物的設定非常重要，一般雞紅細胞作為內參照物。為了結果的可靠性，對獲取的細胞量至少應在10000-20000個。但不同的實驗目的對于獲取的細胞量要求一般是不一樣的，如DNA倍體分析，至少應獲取10000個細胞；微小殘留病灶（MRD）的檢測，要求達到10-4數量級水平，則應至少分析100000個細胞干細胞移植中CD34的檢測，應至少獲取100個CD34陽性細胞或75000個有核細胞。
對于獲取的數據，應保存在listmode文件中，便于分析。設門（gating）對于流式數據分析至關重要。設門實際就是確定分析區域。在DNA倍體分析中，設門實際就是圈定單個細胞，排除粘連細胞。對于細胞成分單一的標本（如培養細胞），設門比較簡單。但對于成分復雜的標本（如骨髓）而言，準確的設門就不那么簡單。前向散射光（FS）與側向散射光（SS）設門干擾因素較多，目前，越來越多的被免疫標記物加散射光設門所取代。如，CD45/SS設門已成為白血病/淋巴瘤免疫分型、CD34檢測、MRD監測最佳的設門方法；CD19/SS設門對于成熟B淋系增生性疾病分析非常適用。
在數據分析中，百分率、熒光強度、DNA指數（DI）、多少個/ul是我們報告中常用的。百分率主要適用于檢驗指標集中在細胞有無的數量變化。如T細胞亞群檢測、網織紅細胞檢測等；熒光強度主要適用于檢驗指標的變化集中在細胞上抗原量的多少。如血小板無力癥（GT）的檢測、慢性淋巴細胞白血病（CLL）CD20的變化等。DI用于DNA倍體分析。而艾滋病劃分中外周血CD4的絕對定量、OKT3治療監測中CD3的絕對定量、干細胞移植中的CD34的定量等等，最終都以多少個/ul的濃度形式表示出來。對于白血病/淋巴瘤免疫分型結果的分析，以前基本上都是以百分率的形式報告臨床，但單純的百分率結果并不能完整的反映腫瘤細胞的特性。因為20%人為認定的陽性判斷標準忽略了低于20%的弱陽性結果，以及忽略了陽性結果之間熒光強弱的差別，而這一切對于白血病/淋巴瘤的診斷和分型卻非常重要。目前，大多主張以文字描述抗原有無和強弱的報告方式，廢棄百分率的報告形式。
四、臨床檢驗的分析過程的質量評價
質量控制也必須重視檢驗方法學的選擇和評價。任何一次實驗都一定有誤差，在一定意義上可以將誤差分為實驗方法學的系統誤差及除此之外的隨機誤差。質量控制的方法和手段都只能減少或消除隨機誤差，但不影響系統誤差。要使檢驗結果的誤差控制在臨床可接受的低水平或者允許的誤差范圍內，必須使用總誤差水平符合臨床要求的檢驗方法（包括儀器、試劑、具體操作方法等），才能保證檢驗結果在質量控制下符合臨床要求。臨床檢驗質量控制的目的，是監測實驗過程中出現重要的誤差時，用適當的方法警告分析人員。一般說來，檢查實驗結果質量的方法是測定質控物，最通用做法是將質控品和病人一起進行常規檢驗，了解檢驗質量則是將質控品測定的結果畫在控制圖上，觀測控制結果是否超過控制限來決定失控與否。
在開始使用質控物的第一個月內，檢驗人員每天將質控物隨機插入病人標本中進行檢驗項目的測定。月末對當月的測定結果（n≥20）做簡單統計，求出均值x和標準差s。若檢驗結果的分布接近正態分布，結果的分布即可用均值和標準差來描述。這就意味著95.5%的結果在x+2s范圍內,99.7%的結果在x+3s范圍內。為便于觀察質控結果，及時了解有何失效情況，常使用質控圖。
按照正態分布規律：1)所有測定值應均勻分布于均值兩側，不應有明顯不均之感；2)質控品測定值應有95.5%的可能性在x±2s范圍之內； 3)不應有連續6次以上的結果落于平均值的一側；4)不能有連續5次以上的結果有逐漸增高或降低的趨勢性變化;5)不應有連續兩次結果在x±2s范圍之外； 6)沒有一次結果在x±3s范圍之外。
如果不符合上述規律，則說明結果失控。只有證實當天質控結果在控制之內,對當天的臨床檢驗才能發出結果。一旦出現失控,則須查明原因，重新檢驗。對有1次檢驗結果超出均數2個標準差范圍，提示警告。同批實驗中2個質控品的結果之差值超過4s，也是失控規則之一，提示存在隨機誤差。連續4次質控結果同方向超出均數1個標準差范圍，也是失控規則之一，提示存在系統誤差。
五、室間質量評價
開展內部的質量控制使實驗的受控項目達到一定的精密度。臨床上往往只對實驗結果是否可重復較敏感，若實驗結果存在較穩定的系統誤差，臨床和實驗室一般不易察覺，因此內部的質量控制還在于控制結果的不精密度。由專門機構定期向臨床實驗室分發質控品,要求各單位檢測后返回測定結果，經過整理和統計，以數據和報告形式反映各實驗室間及各分析方法間的差異，根據各單位測定結果與靶值的離散程度，計算出該實驗室所的分數，及時反饋給參加者，便于改進工作。這就是室間質量評價的基本形式。室間質量評價主要是控制實驗室工作的不準確度，是對室內質量控制的補充。我國于2000年，由衛生部臨床檢驗中心開始組織開展臨床流式細胞術室間質評。現已開展了T細胞亞群檢測和CD34絕對計數的室間質評。
貓有什么傳染病？
貓的疾病很多，其中不少是與人類共患的疾病。在飼養寵物貓的同時，搞好貓病的防治工作，對保證人和貓的健康是很重要的。本節將對貓病進行重點介紹，使讀者對貓病有個概略的了解。
（一）貓泛白細胞減少癥
貓泛白細胞減少癥又稱貓瘟熱、貓傳染性腸炎，俗稱貓瘟，是由貓泛白細胞減少癥病毒引起的一種高度接觸性傳染病。
［病原］為細小病毒科細小病毒屬的貓泛白細胞減少癥病毒。本病毒在細胞核內繁殖并產生核內包涵體。不同地區分離的病毒株其抗原性是相似的。對病毒加熱（75℃、30分）和用0.2%福爾馬林消毒，24小時才能滅活。
［流行病學］本病主要發生于1歲齡以下的幼貓，但各種年齡的貓均可感染。從患病貓或康復貓的糞、尿、唾液和嘔吐物中排出病毒是主要的傳染源。本病通過直接接觸或間接接觸而傳播。跳蚤和其他吸血昆蟲也可成為傳播媒介。
［癥狀］潛伏期2～9天，最急性病例無任何臨床癥狀而突然死亡，尸檢僅見有脫水表現。典型病例是突然發作，精神沉郁，厭食甚至食欲廢絕，體溫高達40℃以上，嘔吐，1～2天內發生腹瀉。繼而產生全身脫水，電解質失衡。病程一般3～5天，可能耐過，死亡率為25%～75%不等。病貓白細胞數量大減是本病的特征性變化。當有細菌或其他病毒合并感染時，可能使癥狀復雜化。
［診斷］根據臨床癥狀和血檢白細胞減少可建立初步診斷，確診應在病毒分離鑒定后作出。
［治療］目前尚無特殊有效的治療方法。對病貓采取對癥治療，控制繼發感染，使用廣譜抗生素，靜脈滴注5%葡萄糖液、林格氏液等糾正脫水，可降低死亡率。
［預防］通過疫苗注射可預防本病，目前已有組織病料培育的滅活苗和弱毒苗。弱毒苗較滅活苗效果好。建議免疫程序：8～10周齡時接種疫苗，以2周的間隔進行第二和第三次接種，以后每年再進行接種。
（二）貓傳染性腹膜炎
本病是由病毒引起的貓科動物的慢性、進行性傳染病，以腹膜炎、大量腹水積累和致死率高為特征。
［病原］為冠狀病毒科冠狀病毒屬的貓傳染性腹膜炎冠狀病毒引起。
［流行病學］各種品種、年齡的貓均易感，但以1～2歲及老齡貓發病居多。傳染途徑一般可經口感染或經媒介昆蟲傳播，也可經胎內垂直感染。
［癥狀］初期癥狀不明顯，病程發展較慢，食欲逐漸減少或間歇性厭食，體重下降，以大量腹水積聚（可多達100毫升），腹部膨脹為特征。一些病例主要侵害眼、中樞神經、腎和肝臟，表現為眼炎、運動障礙等癥狀，幾乎不伴有腹水。
［病變］腹腔大量積液，呈無色透明或淺黃色，稠度似卵白，遇空氣迅速凝固。腹膜及肝、腎、脾等實質器官表面漿膜有纖維樣滲出物。肝臟可見壞死灶。
侵害眼及中樞神經的病型，很少見有腹水。腎臟有肉芽樣結節，肝臟亦可見有壞死灶，有時可見腦水腫病變。
［診斷］根據臨床癥狀、病理變化可作出初步診斷，確診需進行實驗室分離鑒定。
［防治］本病目前尚無有效的防治措施，國外有人建議對確診為本病的貓最好給予安樂死。對污染的環境進行徹底消毒，并消滅貓舍內的吸血昆蟲和嚙齒動物。
（三）貓病毒性鼻氣管炎
［病原］貓病毒性鼻氣管炎是由皰疹病毒科的貓鼻氣管炎病毒引起的高度接觸性傳染病。
［流行病學］本病為高度接觸傳染，發病率可達100%，死亡率可達50%，主要侵害仔貓，成年貓一般能耐過。傳堯源為病貓，通過眼、鼻咽的
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