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01 煌焦油藍活體染色時網織紅細胞步驟(網織紅細胞計數)
Instagram刷粉絲, Ins買粉絲自助下單平台, Ins買贊網站可微信支付寶付款2024-06-09 18:09:00【】0人已围观
简介網織紅細胞計數網織紅細胞Miller;窺盤法;儀器法Keywords:Reticulocyte;Millerocular;Analyzer網織紅細胞是骨髓最新被釋放到外周血的成熟紅細胞的前提紅細胞,同
網織紅細胞計數
網織紅細胞 Miller;窺盤法;儀器法
Key words:Reticulocyte;Miller ocular;Analyzer
網織紅細胞是骨髓最新被釋放到外周血的成熟紅細胞的前提紅細胞,同成熟紅細胞相比,其細胞內仍殘存小量的RNA(嗜堿性物質),是反映骨髓造血功能的早期指標。目前測定網織紅細胞的自動分析儀主要有:多參數流式細胞儀(FCM),某些全自動血液分析儀,如:Sysmex-R系列分析儀,Miles H3型血液分析儀,Coulter Maxm型分析儀,Abbott CD3500血液分析儀[1,2]。國內多采用顯微鏡目測法。現將Sysmex-R3500分析儀,COULTER MAXM分析儀與Miller窺盤法的測定結果進行探討。
1 材料與方法
1.1 材料
(1)SYSMEX-R3500分析儀:日本希森美康株式會社生產。原裝試劑盒和質控物,批號分別是ZA9004,11130091。(2)COULTER MAXM 分析儀:美國COULTER 公司生產。原裝試劑盒和質控物,批號分別是109155,105379K。試劑盒由試劑A與試劑B組成,其主要成分分別是0.06%新亞甲藍與0.08%硫酸。(3)Miller窺盤法的試劑盒:由TONYAR DIAGNOSTICS.INC生產的ASK BCB Solution,批號A10。成分為焦油藍4 g/L與氯化鈉9 g/L。
1.2 方法
(1)SYSMEX-R3500分析儀測定原理:熒光染料堿性槐黃(或者全胺O)(Auramine O,AO)與網織紅細胞內RNA結合,以氬激光束為光源進行測定。操作步驟:混勻血液,直接測定網織紅細胞。(2)COULTER MAXM 分析儀測定原理:血液標本與新亞甲藍孵育活體染色,加入酸性試劑,使紅細胞內的血紅蛋白溢出,保存被染色的RNA于細胞內,細胞通過測定體積,高頻傳導性以及激光散射(VCS)而進行分析,測定出網織紅細胞。操作步驟:向A管加入4滴與50 μl血液標本,混勻,室溫16℃~30℃放置5 min~60 min.取A管液體2 μl于B管,加入試劑B液2 ml,等30 s,手動進樣檢測。(3)Miller窺盤法原理:煌焦油藍活體染色法。操作步驟:見全國臨床檢驗操作規程。為了重復性好,CV值較低,本次實驗采取了計數500個紅細胞內的網織紅細胞百分數。(4)測定SYSMEX-R3500,COULTER MAXM的批內,批間精密度,并與Miller窺盤法進行比較。分別用SYSMEX-R3500分析儀,COULTER MAXM分析儀與Miller窺盤法對130份正常人標本進行網織紅細胞測定,方差分析統計結果
一位熟練的檢驗工作人員對同一標本用Miller窺盤法重復測定15次,結果如下:均值=1.177 5(0.52~1.89),S=0.321 9,CV(%)=27.34。
2.7 用SYSMEX-R3500分析儀,COULTER MAXM分析儀,顯微鏡目測法(Miller窺盤法)同時測定130份血常規在正常范圍的標本。結果F=3.87,P<0.05,差異有顯著性。差異性分析(見表6),相關性分析(見表7)。表6 差異性分析(略)表7 直線相關性分析(略)注:※差異無顯著性,★差異有顯著性,★★差異有極顯著性,△相關。
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